猪圆环病毒3型衣壳蛋白通过抑制雷帕霉素靶蛋白的磷酸化诱导HEK293T细胞自噬

摘要

目的:探明猪圆环病毒3型衣壳(Cap)蛋白如何诱导细胞自噬。创新点:首次证明猪圆环病毒3型Cap蛋白诱导细胞自噬,泛素-蛋白酶体途径也参与其中。方法:构建过表达猪圆环病毒3型Cap蛋白的真核表达载体,转染HEK293T细胞,采用免疫印迹检测LC3、p62和m TOR等自噬通路的关键分子。利用激光扫描共聚焦显微镜和透射电镜,观察表达Cap蛋白的细胞是否有EGFP-LC3B点状聚集和自噬泡生成。利用氯喹抑制溶酶体酸化,探究衣壳蛋白是否诱导完整的自噬流。利用MG132抑制蛋白酶体途径,探究泛素-蛋白酶体途径是否参与自噬过程。结论:猪圆环病毒3型Cap蛋白通过抑制雷帕霉素靶蛋白的磷酸化诱导HEK293T细胞自噬,泛素-蛋白酶体途径也参与这一过程。