细胞裂解液对蛋白质定量方法的影响

摘要

目的：观察不同细胞裂解液对Bradford法和bicinchoninic acid（BCA）法的影响，以确定适合蛋白质组学研究中细胞全蛋白含量的定量方法。方法：采用Bradford法和BCA法测定牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）样品溶液，样品BSA溶液分别由双蒸水和不同裂解液（荧光差异双向凝胶电泳裂解液、三种传统双向凝胶电泳裂解液）配制；然后，采用这两种方法测定上述裂解液所提取的细胞全蛋白样品；采用Bradford法定量反复冻融、不同比色杯和不同时期标准曲线下的样品。结果：各细胞裂解液对Bradford法均有显著性影响，使所定量的BSA浓度普遍偏高1．2至2倍，但定量值可随着加样浓度的增加而增加（r=0．989～0．996，P〈0．05）；各裂解液对BCA法也均有显著性的干扰，多数定量结果超出仪器读数范围；对于同批全蛋白溶液样品，BCA法的定量结果与Bradford法相比可有千倍差异；反复冻融后蛋白浓度变化统计学上无显著性差异，但有下降趋势，不同比色杯和不同时期标准曲线对Bradford法无显著影响。结论：Bradford法是蛋白质组学中细胞全蛋白定量的较适方法，但需根据具体实验进行优化。