br基因的克隆及表达

摘要

细菌视紫红质（Bacteriorhodopsin,BR）是嗜盐菌细胞膜上唯一的一种光能转换色素蛋白，BR以视黄醛（retinal）作辅基，在光诱导下吸收光子后会产生一系列的光循环中间体，最后又回到原始状态。由于BR这种独特的分子结构和光循环过程，及其作为一种具有光敏特性的蛋白质生物分子，可通过生物学技术进行改造，正引起光子学研究及生物学研究领域的高度注意。从Genbank查询br基因的全序列，然后采用聚合酶链反应（Polymerasechain reaction,PCR）技术，采用DNAstar软件辅助设计了上下游引物，以嗜盐菌(Halobactrium Halobium)的基因组DNA为模板克隆获得了完整的细菌视紫红质基因br，并且将经测序鉴定的br基因重组到原核高效表达载体pGEX-4T-2中，转化大肠杆菌E.coli.，将阳性转化子经IPTG诱导表达获得BR与GST（谷胱苷肽转移酶）的融合蛋白后，提取蛋白进行SDS-PAGE电泳、Western印迹反应，检测表达结果为阳性，且表达蛋白的大小与预想的一致。