不同抗性番茄叶片接种晚疫病后总RNA提取方法及实时荧光定量PCR比较

摘要

为筛选出适合番茄晚疫病接种材料总RNA的提取方法,本研究选取番茄感病5#自交系和抗病CLN2037E自交系正常生长和晚疫病接种的叶片为材料,比较Takara公司（货号）9109、9752Q、9769S和北京华越洋公司ZH120等4种RNA提取试剂盒。结果表明：方法 9109和ZH120均能获得较清晰的RNA电泳条带。ZH120提取RNA的OD260nm/OD280nm在1.92-2.08之间,得率在316.38-359.71μg/g之间,其他3种方法提取RNA的完整性和纯度均不高。四种方法提取的RNA均能通过反转录PCR克隆出番茄Actin和RPL2基因片段。以ZH120方法提取的RNA为模板时,基因RPL2实时荧光定量PCR的溶解曲线峰值单一,扩增曲线和Ct值重复性好,变异系数低。结果表明：ZH120试剂盒可作为番茄正常及晚疫病接种叶片RNA提取的适宜方法,并为后续基因克隆及表达谱分析等分子生物学研究提供高质量的RNA。