“-GCT(A)GCGAGATC-”序列负向调控Nanog基因启动子-135/-230区活性研究

摘要

目的探究Nanog启动子-332/+50区与双荧光素酶报告载体p GL4. 10连接后负向调节Nanog-135/-230区活性的调节序列。方法截短法将Nanog启动子-812-+171区不同片段与p GL4. 10载体连接,脂质体转染法将各载体分别与内参载体p RL-TK共转入细胞,双荧光素酶系统报告系统检测报告基因的表达变化。结果Nanog启动子-812/-332区、+50/+171区及-332/+51(或+56)区均不含Nanog-135/-230区的负向调控元件,改变Naong-332/+50区与报告载体p GL4. 10的连接位点(NheⅠ,BglⅡ)行成序列"-GCT (A)GCGAGATC-"即可消除Nanog启动子-332/+50对报告基因的正向调控作用。结论待检测启动子与载体连接构成"-GCT(A) GCGAGATC-"序列后可负向调控Nanog-135/-230区的活性。