人神经生长因子重组腺伴随病毒载体的构建

摘要

目的为了研究人神经生长因子(hNGF)基因导入急性脊髓损伤(SCI)模型的治疗作用,构建并产生重组腺伴随病毒(AAV)载体.方法将hNGF外源性核酸片段插入AAV-shuffer质粒pSSHG-Neo的KpnⅠ-BamHⅠ位点构建AAV.用腺病毒辅助质粒pFG140代替野生型腺病毒,包装质粒pAAV/Ad及已构建的pSSHG-Neo三质粒磷酸钙共沉淀法在肾胚胎293细胞系中同源重组包装rAAV.使用地高辛标记的斑点杂交方法测定重组病毒滴度.结果成功构建了重组病毒质粒pSSHG/hNGF,经蔗糖梯度离心法获得rAAV组分,梯度稀释测得滴度为1.46×1012 PFU·mL-1.结论成功地制备了人神经生长因子重组腺伴随病毒(rAAV/hNGF)载体,为SCI基因治疗实验奠定了基础.