人永生化表皮细胞HaCaT电转染条件的优化

摘要

目的 比较不同电转染条件下,人永生化表皮细胞HaCaT的转染效率,探讨影响HaCaT电转染率和存活率的主要因素,筛选出HaCaT细胞最佳的电转染条件.方法 应用电穿孔仪,设定不同的电压(180、360、540、720 V)、脉冲时间(40、60、80、100、120μs)、脉冲周期(1、2、3、4、5次)和温度(室温和4℃)等条件,将质粒(pGPU6/GFP/nev)电转染至HaCaT细胞.电转染24 h后,荧光镜下和光镜下分别计算绿色荧光阳性细胞数和总细胞数,并随机取3个视野算平均值,计算电转染率;MTT法检测电转染后细胞的存活率.结果 当HaCaT细胞浓度为1.5×106/mL,pGPU6/GFP/nev质粒浓度为2.0 μg/mL,HaCaT细胞的最佳电转染条件为540 V/60 μs/Pulse1/RT,此时细胞生长状态最佳,电转染率可达到33.23％,细胞存活率为61.22％.结论 本实验优化了HaCaT细胞电转染的最佳条件,提高了HaCaT细胞电转染效率,为后续基因功能的研究奠定了基础.