骨髓间充质干细胞与内皮细胞平面共培养促进微血管网形成的初步研究

摘要

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)与内皮细胞(ECs)在不使用Matrigel等基质,以及在含或不含血清的条件下,于普通平面培养皿上共培养的成网能力,为日后两类细胞相互作用的研究提供一种外界干扰最少的共培养条件。方法以全骨髓贴壁培养法分离培养大鼠BMSCs,并从培养形态、细胞表面标记物和三系分化能力等方面予以鉴定。以添加或不添加10%FBS的低糖DMEM为培养液,将大鼠BMSCs与ECs共培养于普通平面培养皿上,连续观察微血管网的形成过程,并通过CM-Dil标记特定细胞的方法了解血管网中细胞构成。平滑肌细胞标记物SM22α,Calponin及内皮细胞标记物CD31被用于检测上述条件下微血管网中细胞标记物变化。结果通过全骨髓贴壁培养可分离并获得大鼠BMSCs。在含10%FBS条件下,细胞于普通平面培养皿上共培养8 d可形成明显的微血管网,微血管网由大鼠BMSCs和ECs共同构成;在无血清共培养条件下,大鼠BMSCs和ECs可于24 h内共同参与形成微血管网。免疫荧光染色显示CD31+细胞和SM22α+/Calponin+细胞共同构成网状结构。结论在普通平面培养皿上,以含血清或不含血清的培养液共培养大鼠BMSCs和ECs均可形成微血管网。