基于网络药理学、分子对接及实验探讨茵陈蒿汤调节阻塞性黄疸氧化应激的作用机制

摘要

目的:运用网络药理学探讨茵陈蒿汤调节阻塞性黄疸氧化应激的作用机制,并用分子对接及免疫组化进行验证.方法:首先利用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)和UniProt数据库检索并筛选茵陈蒿汤有效成分及作用靶点;通过Gene Cards数据库检索阻塞性黄疸的作用靶点;利用R语言将疾病与药物的有效靶点进行分析,确定交集靶点;通过STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白互作网络;利用R语言进行基因本体论(GO)生物学过程富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;利用Autodock_vina软件对内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和茵陈蒿汤主要化学成分进行分子对接验证;最后通过免疫组织化学方法(IHC)验证茵陈蒿汤对阻塞性黄疸大鼠肝组织中eNOS和iNOS的影响.结果:研究共筛选获得茵陈蒿汤中29个有效成分及177个作用靶点,阻塞性黄疸的2183个疾病靶点,茵陈蒿汤和阻塞性黄疸的交集靶点123个;经GO和KEGG富集分析得到133个GO生物过程和127个相关信号通路,主要涉及Hepatitis B、流体剪应力与动脉粥样硬化、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)、肝细胞癌、低氧诱导因子(HIF)-1等信号通路;拓扑属性分析发现槲皮素、山奈酚、异鼠李素等主要成分和Akt1、TP53、白细胞介素(IL)6、血管内皮生长因子(VEGF)A、eNOS和iNOS等关键靶点.分子对接验证表明,eNOS和iNOS蛋白与槲皮素、山奈酚、异鼠李素有较好的亲和能力;IHC实验证明与假手术组相比,模型组肝组织中eNOS表达水平降低,而iNOS表达水平升高(P<0.05);与模型组相比,茵陈蒿汤组肝组织中eNOS表达水平升高,iNOS表达水平降低(P<0.01).结论:茵陈蒿汤对阻塞性黄疸的作用具有多成分、多靶点、多通路的特点,茵陈蒿汤对阻塞性黄疸氧化应激的调节可能与改变eNOS、iNOS蛋白的表达有关.