猪miR-23a-27a-24簇启动子预测及活性分析

摘要

目的 本研究旨在对猪miR-23a-27a-24簇(miR-23a-27a-24 cluster)的潜在启动子区域进行预测和分析,为进一步探索miR-23a-27a-24基因对猪转录调控机制的研究奠定基础。方法 利于生物信息学分析猪miR-23a-27a-24簇的启动子区域、CpG岛及其潜在的转录因子;利用截短突变和PCR技术克隆得到5个逐级缺失的miR-23a-27a-24基因启动子片段,构建双荧光素酶报告载体,通过检测各载体的双荧光素酶活性获得miR-23a-27a-24基因的核心启动子区域。结果 pGL3-cMiR启动子在猪miR-23a-27a-24簇上游341bp至994bp区荧光素酶活性最强,为pGL3-basic空载体活性的5.02倍(P<0.05),视为miR-23a-27a-24簇核心启动区。生物信息学分析表明:猪miR-23a-27a-24簇启动子区不含CpG岛,其核心启动子区可能存在SP1、VDR、MAZ、YY1、E2F1和ELF1六种潜在的转录因子结合位点。结论 本研究构建并确定了猪miR-23a-27a-24簇核心启动子区域,可为今后开展猪miR-23a-27a-24簇的转录调控机制奠定基础。