八肋游仆虫蛋白激酶A的克隆及原核表达分析

摘要

为了研究低等真核生物中蛋白激酶PKA（cAMP-dependent protein kinase A）的生物学功能,以八肋游仆虫（Euplotes octocarinatus）为实验材料,通过生物信息学方法分析八肋游仆虫基因组及转录组数据,发现八肋游仆虫中编码蛋白激酶PKAc（PKA催化亚基）的基因只有一种。通过PCR扩增获得游仆虫PKAc基因（EoPKAc）,分析表明EoPKAc基因全长1158bp,不含有内含子,开放阅读框981bp,编码326个氨基酸。序列比对结果显示EoPKAc含有与其它已知蛋白激酶相同的11个亚结构域（subdomain）以及一些重要的保守氨基酸。构建原核表达质粒pGEX-6P-1-PKAc,转化至大肠杆菌BL21中,EoPKAc获得高效表达,经GST柱亲和层析后获得较高纯度的EoPKAc蛋白,表达产物经Western blotting检测为阳性。