芦丁减轻LPS诱导的牙周膜干细胞炎症、成骨分化和成脂作用

摘要

目的探究芦丁对脂多糖(LPS)诱导的牙周膜干细胞(PDLSCs)成骨分化、成脂作用和TLR4信号通路的影响。方法通过分离培养获取PDLSCs,将PDLSCs细胞分别用不同浓度LPS(0,0.1,1和5μg/ml)和不同浓度芦丁(0,0.01,0.1,1,5,10,50和100μmol/L)培养14 d,通过形态学观察、碱性磷酸酶(ALP)活性测定、ALP染色和qPCR测定LPS和芦丁对PDLSCs成骨分化的影响;茜素红S染色评估钙沉积物的形成。再将PDLSCs细胞分为对照组、芦丁组、LPS组和LPS+芦丁组。ELISA试剂盒测定LPS对PDLSCs中炎性细胞因子和氧化应激的影响;蛋白质印迹分析技术测定LPS对PDLSCs中TLR4及NF-κB通路蛋白表达水平的影响。结果ALP和茜素红S染色结果显示,与0μg/ml LPS相比,0.1μg/ml LPS组ALP的表达水平显著降低、钙沉积物的形成显著减少(P<0.01)。在芦丁浓度为10μmol/L时ALP的活性最高;与10μmol/L的芦丁相比,50μmol/L和100μmol/L芦丁处理下ALP活性均显著降低(P<0.05)。与对照组相比,LPS组TNF-α、IL-6、IL-1β、ROS、NO、iNOS、PPARγ、LPL、p-NF-κB p65、MyD88和TLR4的表达水平显著升高(P<0.01);与LPS组相比,LPS+芦丁组TNF-α、IL-6、IL-1β、ROS、NO、iNOS、PPARγ、LPL、p-NF-κB p65、MyD88和TLR4的表达水平显著降低(P<0.01)。结论芦丁通过抑制PDLSCs中TLR4/NF-κB途径中关键因子的表达水平,从而减轻LPS诱导的炎症、成骨分化和成脂作用。