柠檬苦素对DDP耐药胃癌细胞化疗敏感性的影响

摘要

目的 探讨柠檬苦素对胃癌细胞化疗敏感性的影响及其机制.方法 将对顺铂(DDP)耐药的SGC-7901细胞株(SGC-7901/DDP)分为4组:对照组、柠檬苦素组、DDP组和柠檬苦素+DDP组.对照组为正常培养的SGC-7901/DDP细胞,柠檬苦素组SGC-7901/DDP细胞采用40μmol/L柠檬苦素处理,DDP组SGC-7901/DDP细胞采用16μmol/L DDP处理,柠檬苦素+DDP组SGC-7901/DDP细胞采用40μmol/L柠檬苦素+16μmol/L DDP处理.通过MTT法和集落形成实验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫荧光染色检测细胞中 γ-H2AX的表达,Western blot检测细胞中Bax、Bcl-2、cleavedCaspase-3、cleaved PARP1、γ-H2AX和53BP1的蛋白表达.通过对小鼠左腋皮下注射200μl SGC-7901/DDP细胞(2×106)构建SGC-7901/DDP细胞移植瘤BALB/c-nu小鼠模型,然后将小鼠随机分为4组(n=6):模型组、柠檬苦素组、DDP组和柠檬苦素+DDP组.模型组小鼠不进行治疗.柠檬苦素给药剂量为每天10 mg/kg,DDP给药剂量为每天5 mg/kg,给药体积均为0.1 ml.连续治疗7 d.每隔1周统计肿瘤体积,并分析18个月随访期内的小鼠存活率.结果 体外实验中,与柠檬苦素组和DDP组相比,柠檬苦素+DDP组的细胞存活率和集落数量均降低,而细胞凋亡率升高(均P<0.05).与柠檬苦素组和DDP组相比,柠檬苦素+DDP组的Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达水平均升高,Bcl-2蛋白表达水平均降低(均P<0.05).与柠檬苦素组和DDP组相比,柠檬苦素+DDP组γ-H2AX阳性率升高,cleaved PARP1、γ-H2AX和53BP1蛋白表达水平均升高(均P<0.05).在体实验中,与柠檬苦素组和DDP组相比,柠檬苦素+DDP组的肿瘤体积降低(P<0.05).随访18个月内,各组小鼠的生存率存在显著差异(P<0.05).结论 柠檬苦素通过抑制DNA损伤修复来增强胃癌细胞的化疗耐药性.