微小RNA-6833-3p负调控LPIN1基因表达对肺癌细胞周期和增殖的影响

摘要

目的 探讨微小RNA-6833-3p(miR-6833-3p)通过靶向调控脂蛋白1(lipin 1,LPIN1)的表达影响肺癌细胞周期和增殖的作用及机制.方法 采用实时定量PCR(qPCR)检测miR-6833-3p在肺癌细胞(HCC827、A549、H1650、H1299)和永生化正常肺泡上皮细胞(HPAEpiC)中的表达水平.以携带miR-6833-3p的慢病毒或阴性对照慢病毒感染表达最低的肺癌细胞,分别命名为miR-6833-3p组和对照组.流式细胞术和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分别检测miR-6833-3p对肺癌细胞周期和增殖的影响.采用生物信息学软件预测miR-6833-3p的潜在靶基因,采用双荧光素酶报告基因实验进行验证miR-6833-3p和靶基因的结合.qPCR和Western blot检测miR-6833-3p对靶基因和细胞周期蛋白表达的影响.结果 与HPAEpiC相比,miR-6833-3p在肺癌细胞中均呈现低表达(P<0.05),H1299细胞中的表达最低(P<0.01).与对照组比较,miR-6833-3p组H1299细胞中miR-6833-3p的表达水平明显增加(P<0.01).与对照组相比,miR-6833-3p组中G0/G1期细胞比例明显增加(P<0.01),S期和G2/M期细胞比例明显减少(P<0.01).与对照组比较,miR-6833-3p组H1299细胞的增殖从第3天开始明显降低(P<0.05).生物信息学软件预测miR-6833-3p的潜在靶基因是LPIN1,miR-6833-3p可与LPIN1 mRNA 3′非翻译区靶向结合(P<0.01).与对照组相比,miR-6833-3p组LPIN1基因表达显著减少(P<0.01),细胞周期蛋白CDK2、CDK4及Cyclin D1表达显著降低(P<0.01).结论 miR-6833-3p在肺癌细胞中表达降低,miR-6833-3p通过干扰LPIN1基因的表达,抑制肺癌H1299细胞周期和增殖,miR-6833-3p具有成为肺癌诊疗新靶点的潜力.