右美托咪定对机械拉伸A549细胞IL-8和PAI-1表达及细胞凋亡率的影响

摘要

目的本研究模拟机械通气诱发肺损伤,探讨不同浓度右美托咪定对机械拉伸损伤A549细胞PAI-1、IL-8表达及细胞凋亡率的影响。方法①将体外培养的肺Ⅱ型上皮细胞(A549细胞)随机分为非机械拉伸组和机械拉伸组,每组按拉伸时间分为4个亚组:0 h组、4 h组、12 h组和24 h组。机械拉伸组与体外细胞应力加载装置拉伸相连接,机械拉伸加载装置拉伸幅度为20%,频率为0.3 Hz的正弦波,非机械拉伸组不与拉伸装置连接。采用MTT比色法和ELISA测定细胞存活率和PAI-1、IL-8的表达水平,筛选A549细胞损伤最明显的时间。②将A549细胞接种于包被胶原基底膜(胶原基底蛋白Ⅰ)的BioFlex6孔培养板,分为预处理对照组和预处理拉伸组,每组分为4个亚组,并在机械拉伸前20 min滴加不同浓度右美托咪定(0,0.01,0.1,1μmol/L)进行预处理。预处理拉伸组与体外细胞应力加载装置拉伸相连接,机械拉伸加载装置拉伸幅度为20%,频率为0.3 Hz的正弦波,持续拉伸24 h;预处理对照组不与拉伸装置连接,不拉伸。采用流式细胞术测定细胞凋亡率,ELISA法测定PAI-1和IL-8的表达。结果与各自非机械拉伸组相比,机械拉伸4,12,24 h细胞存活率明显降低(P0.05),机械拉伸4 h组和12 h组PAI-1表达差异无统计学意义(P>0.05),但24 h组PAI-1表达水平显著上调(P0.05)。结论机械拉伸能下调A549细胞存活率,上调PAI-1和IL-8表达。右美托咪定预处理可下调PAI-1和IL-8表达,降低机械拉伸后A549细胞的凋亡率,提示右美托咪定预处理可能减轻机械拉伸肺上皮细胞损伤。