外周血生物活性成分对IL-1β刺激的人软骨细胞的影响

摘要

目的 探讨外周血生物活性成分自体有核细胞处理物(autologous nucleated cell treatment,ACT)对白介素-1β(IL-1β)刺激的人软骨细胞迁移、增殖、凋亡与细胞因子分泌的影响。方法 采用甲苯胺蓝染色对体外培养的人软骨细胞株C28/I2进行鉴定,有核细胞处理试剂盒制备外周血ACT。将软骨细胞分为对照组(常规培养)、IL-1β组(10 ng/ml IL-1β处理)和ACT组(10 ng/ml IL-1β处理48 h后加入ACT)。C28/I2细胞中加入ACT后,各组继续培养48~72 h,并每隔24 h进行观察或取样分析。划痕实验分析C28/I2迁移能力,CCK-8法检测其增殖能力,Hoechst33342染色观察细胞凋亡情况,ELISA测定C28/I2分泌TNF-α、MMP-13、COL2的水平。结果 甲苯胺蓝染色鉴定培养的C28/I2为正常软骨细胞。相比对照组,IL-1β组C28/I2细胞迁移率均下降(P<0.05),细胞增殖活性在24 h明显降低(P<0.01),而细胞凋亡率均显著升高(P<0.001)。IL-1β组TNF-α分泌水平在24,48,72 h相比对照组显著上调(P<0.05),MMP-13分泌水平在0,24,48,72 h均显著上调(P<0.05),而COL2分泌水平在72 h时明显下调(P<0.05)。相比IL-1β组,ACT组C28/I2细胞迁移率均升高(P<0.05),细胞增殖活性在72 h时显著提高(P<0.05),同时细胞凋亡率明显下降(P<0.05)。此外,ACT组TNF-α、MMP-13分泌水平相比IL-1β组在24,48,72 h均显著下调(P<0.05),而COL2水平明显升高(P<0.01)。结论 外周血ACT能够明显改善IL-1β刺激的软骨细胞的生物学活性,促进细胞的迁移与增殖,减少其凋亡,从而有效抑制软骨细胞损伤。这些变化可能与ACT对软骨细胞中炎症因子表达,以及对细胞外基质(ECM)降解、合成之间动态平衡的调控紧密相关。