Aggrecan Northern探针的构建及其在组织工程研究中的应用

摘要

目的 构建猪aggrecan探针,用于对组织工程化软骨及软骨细胞中aggrecan mRNA表达水平的Northern检测。 方法 取猪软骨细胞,RT-PCR扩增aggrecan球间区域(IGD)片段。将纯化的RT-PCR产物克隆入pUCm-T载体,酶切、测序鉴定。32P标记aggrecan探针,Northern杂交法检测组织工程化软骨和软骨细胞中aggrecanmRNA的表达状况。 结果 构建产物经鉴定,证实其包含了猪aggrecan IGD的基因序列。Northern结果显示,该探针可用于对组织和细胞中aggrecan mRNA表达水平的检测。 结论 在组织工程化软骨的研究中,利用Northern杂交法对样品中aggrecan mRNA的水平进行检测,具有良好的灵敏度、可信度和特异性。