铜绿假单胞菌感应分子对照质粒及整合突变株的构建

摘要

目的研究细胞间信息传递机制之一假单胞菌喹诺酮信号(PQS)在铜绿假单胞菌发病机制中的作用。方法基于基因融合分析在转录研究中的实用性,构建了两种PQS相关对照质粒和整合突变株。一种是酶切质粒pYHP441获得pqsA’-lacZ片段后,亚克隆入质粒m in iCTX-1中,构建成pqsA’的阳性表达质粒,随后将构建的质粒,通过双亲交配过程整合入野生型铜绿假单胞菌株PAO-1染色体组中;另一种是通过点特异插入诱变策略,将四环素基因盒插入启动子pqsD和pqsE之间,构建的阴性质粒转化入大肠杆菌S17-1株后,和上述pqsA’阳性表达突变株进行双亲交配过程。结果针对今后PQS的相关研究,构建得到稳定表达PQS的质粒和阳性突变株作为阳性对照。构建获得pqsA-E启动子敲除质粒和相应PQS表达受阻的整合突变株作为阴性对照。结论两种质粒和整合突变株的构建成功,使得PQS的相关研究结论具有客观性、精确性和有效性。