livinβ-siRNA表达载体的构建及其在人星形胶质瘤细胞中的稳定表达

摘要

目的 构建livinβ-siRNA表达载体,并观察其在人星形胶质瘤细胞(U251)中对livinβ基因表达的抑制.方法 根据livinβ序列设计2条livinβ-siRNA特异性序列,PCR扩增方法合成2条siRNA链,与质粒pGenesil-11重组构建livinβ-siRNA表达载体,脂质体法转染人星形胶质瘤细胞(U251),RT-PCR和Western blot检测细胞中livinβ基因及蛋白表达.结果 对重组质粒的双酶切鉴定和测序结果证明,livinβ-siRNA表达载体pGenesil-11-1ivinβ-siRNA构建成功；RT-PCR检测转染组细胞中livinβ mRNA表达水平明显低于对照组及空载体组,Western blot检测转染组细胞中livin蛋白表达水平明显低于对照组及空载体组,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 本实验成功构建了livinβ-siRNA表达载体pGenesil-11-livinβ-siRNA,并且该载体能在真核细胞人星形胶质瘤细胞(U251)中稳定表达,并能抑制livinβ基因表达.