中国和美洲大豆胞囊线虫rDNA-ITS-RFLP分析

摘要

大豆胞囊线虫Heterodera glycines(SCN)广泛分布于亚洲和美洲,在中国和美洲被认为大豆主要病害.SCN从遗传上讲不是纯的,并且可以在短时间内克服大豆的抗性,在此研究中,应用了被认为具有较大变异的遗传区域-内转录间隔区(包括5.8S、ITS1和ITS2),来分析中国和美洲的美国、加拿大、阿根廷SCN群体的种内变化.本试验在大豆田中采集16个SCN样品用于测定,所有样品收集后在温室大豆感病品种Essex上进行繁殖,获取卵和二龄幼虫,进行DNA提取,用PCR扩增ITS片段之后,用17种限制性内切酶来酶切PCR产物,共产生25条酶切片段.其中Xba,BamHⅠ,HindⅡ,HindⅢ, SstⅠ, XhoⅠ, NcoⅠ和SacⅠ 8种限制性内切酶没能切开SCN群体的rDNA-ITS的PCR扩增产物.用AvaⅠ, EcoRⅠ,HinfⅠ,AluⅠ,HaeⅢ,ClaⅠ,MboⅠ,AccⅠ和RsaⅠ 9种限制性内切酶酶切SCN群体的rDNA-ITS的PCR扩增产物后都得到了2个以上的RFLP片断;用限制性内切酶AluⅠ, EcoRⅠ, HinfⅠ, HaeⅢ, ClaⅠ, MboⅠ, AccⅠ和RsaⅠ酶切所有的SCN群体的rDNA-ITS的PCR扩增产物都分别得到了相同的RFLP片断,只有AvaI酶切SCN群体的rDNA-ITS的PCR扩增产物后产生了多态性.中国SCN 用AvaI酶切后,产生3条片段,而中国以外的美洲(美国、加拿大、阿根廷)的11个SCN均产生2条片段.此结果显示中国SCN群与美洲SCN群体内存在着多样性, 也说明rDNA-ITS-RFLP方法是SCN种内多样性的一个有力的诊断工具.