电针通过激活lncRNA XmiR-146aNav 1.7轴改善卒中大鼠抑郁的机制

摘要

目的探讨电针通过激活lncRNA XmiR-146aNav 1.7轴抑制卫星胶质细胞(SGC)炎症并改善卒中大鼠抑郁的机制。方法应用随机数字法将SD大鼠分为对照组、模型组和电针组,各15只。离体培养的SGC的分组:从Genepharma(中国上海)构建了携带miR-146a抑制剂(LV-anti-miR-146a,150 nM)或阴性对照(LV-nc,100 nM)的重组慢病毒载体,感染SGC 24 h。NC为正常培养。通过蔗糖偏好和运动活动比较大鼠的抑郁样行为。蛋白质印迹检测大鼠海马组织TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达。通过PCR检测大鼠脑组织中lncRNAXIST/miR-146a/Nav 1.7的mRNA表达。通过双荧光素酶报告实验检测miR-146a与XIST的3’-UTR,miR-146a与Nav1.7间的相互作用。结果模型组大鼠的蔗糖偏好指数和运动计数较对照组减少(P<0.05),电针组大鼠的蔗糖偏好指数和运动计数较模型组增加(P<0.05),模型组神经损伤评分较对照组升高(P<0.05),电针组神经学损伤评分较模型组降低(P<0.05)。模型组TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白表达较对照组升高(P<0.05),电针组TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白表达较模型组降低(P<0.05)。模型组XIST和Nav1.7 mRNA表达较对照组升高(P<0.05),电针组XIST和Nav1.7mRNA表达较模型组降低(P<0.05);模型组miR-146a的mRNA表达较对照组降低(P<0.05),电针组miR-146a的mRNA表达较模型组升高(P<0.05)。与Mut-XIST相比,LV-anti-miR-146a与Wt-XIST结合位点的荧光素酶活性降低(P<0.05),miR-146a抑制XIST的荧光素酶活性,RNA pull-down分析显示Bio-XIST可下调miR-146,而Bio-XIST-mut不能(P<0.05)。miR-146a抑制Nav1.7的荧光素酶活性(P<0.05),LV-miR-146a感染引起的miR-146a过表达抑制了Nav1.7编码基因SCN9A的转录(P<0.05)。结论电针通过激活lncRNA XmiR-146aNav 1.7轴抑制SGC炎症,从而有效缓解脑卒中后抑郁的抑郁样行为。XIST作为miR-146a海绵促进miR-146a靶基因Nav1.7的表达,从而调节SGC激活。