核糖体蛋白RPS3a腺病毒载体的构建和体外表达

摘要

目的构建核糖体蛋白RPS3a的腺病毒表达载体,并进一步验证其在细胞中的表达。方法应用RT-PCR从人胚肾HEK293细胞的总RNA中反转录并扩增出RPS3a基因,并将RPS3a亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV中,酶切及测序鉴定后,再将含RPS3a基因的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-RPS3a进行PineⅠ酶线性化处理,转化到含有骨架质粒的BJ5183感受态菌,进行同源重组。鉴定后,经PacⅠ线性化转染HEK293细胞,包装重组腺病毒。病毒感染NIH3T3细胞,Western blot分析RPS3a蛋白的表达。结果证实pAdTrack-CMV-RPS3a及pAdEas-RPS3a质粒构建正确;Western blot检测病毒感染的NIH3T3细胞总蛋白,与pAd-GFP阴性对照组相比,RPS3a蛋白表达量显著提高。结论成功构建了能表达RPS3a基因的重组腺病毒载体,为进一步研究其生物学功能奠定基础。