高效液相色谱法测定体外大鼠肠道菌液中大豆苷及其代谢物

摘要

目的建立HPLC法测定体外大鼠肠道菌液中的大豆苷及其代谢物,研究大鼠肠道菌群对大豆苷的代谢情况。方法采用大鼠离体粪便温孵法,将大豆苷与大鼠肠道菌群培养液进行厌氧温孵。温孵样品采用甲醇沉淀蛋白处理后进行HPLC法分析,色谱条件:色谱柱为Diamonsil C18柱;流动相为0.2%乙酸水溶液与甲醇,梯度洗脱;检测波长为260nm;柱温为25℃;进样量为10μl。结果大豆苷及其代谢物大豆苷元分别在98.0~490、57.6~288μg/ml浓度范围内线性良好,高、中、低3个浓度的相对回收率在96.6%~114.0%之间,相对标准偏差小于9.9%,表明本法的准确度和精密度符合要求。大豆苷在肠道菌液中代谢生成大豆苷元,其消除半衰期为37.6min。结论所建立的HPLC法适合同时测定体外大鼠肠道菌液中的大豆苷及其代谢物,大豆苷在体外代谢的主要途径为糖苷键断裂转化成对应苷元。