胞内转运对根尖牙乳头干细胞表面CXC趋化因子受体4表达的影响

摘要

目的:探讨胞内转运途径受到抑制后,根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)表面CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)表达的变化,为了解SCAP迁移机制提供实验依据。方法:采用免疫荧光共染色方法和原位邻近连接技术(proximity ligation assay,PLA)检测SCAP胞内CXCR4与细胞胞内转运相关细胞器标记蛋白的共定位,检测指标包括早期胞内体标记蛋白Rab5、循环胞内体标记蛋白Rab11A、溶酶体标记蛋白Lamp1。分别采用80μmol/L的内吞抑制剂Blebbistatin、80μmol/L的内吞抑制剂Dyanasore对SCAP进行预处理1 h,流式细胞分析方法检测表面阳性表达CXCR4的SCAP所占百分比,使用单因素方差分析进行统计学分析。结果:免疫荧光共染色结果显示,CXCR4在SCAP胞内的表达位置与早期胞内体标记物Rab5、循环胞内体标记物Rab11A的表达位置重合,小部分与溶酶体标记物Lamp1的表达位置重合。PLA结果显示,CXCR4在SCAP胞内与Rab5、Rab11A、Lamp1均存在共定位。阴性对照组SCAP CXCR4阳性表达的细胞为0.13%±0.10%,经Blebbistatin、Dynasore抑制内吞后,表面CXCR4阳性表达的SCAP显著增多,分别为13.34%±1.31%、4.03%±0.92%,差异有统计学意义(F=161.762,P<0.001),且Blebbistatin组多于Dynasore组,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:采用内吞抑制剂抑制CXCR4的胞内转运途径,可使表面表达CXCR4的SCAP增多,提升了SCAP迁移的潜能。