天然山地樟子松遗传多样性研究的ISSR-PCR反应体系的优化

摘要

以樟子松基因组DNA为模板,研究了ISSR的影响因素,建立了一套适宜于樟子松的ISSR优化反应体系及程序,以期为进行樟子松种群间遗传分化的研究奠定基础.研究结果表明,20μL反应体系中,模板DNA、引物、Mg2+、dNTP和Taq DNA聚合酶5种主要成分的最适浓度分别为35 ng、150 nmol/L、1.5 mmol/L、200μmol/L、1.5 U.反应程序为:94℃预变性5 min,之后进行34个循环,每个循环包括94℃变性30 s、56℃退火45 s、72℃延伸2min,最后于72℃延伸7min.在扩增过程中,引物的适宜退火温度比其Tm值平均高4℃,扩增出足量产物至少需要35个热循环.