二甲双胍对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成的影响及机制

摘要

目的探讨二甲双胍对增生性瘢痕成纤维细胞增殖、胶原合成及TGFβ1/Smad信号通路磷酸化水平的影响。方法取增生性瘢痕组织,收集第3~6代成纤维细胞(Fb),分为空白对照组(PBS处理)和5、10、20、30 mmol·L^(-1)的二甲双胍处理的实验组,每组3孔,观察各组给药刺激24 h后细胞形态变化,给药刺激24 h后提取各组细胞总RNA,检测各组增生性瘢痕成纤维细胞中CollagenⅠ、CollagenⅢ和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA相对表达水平。给药刺激48 h后提取细胞总蛋白,Western blot技术检测TGFβ1、Smad3磷酸化水平、CollagenⅠ、CollagenⅢ和α-SMA的蛋白相对表达水平,采用CCK-8法检测各组细胞增殖活力。结果5、10、20、30 mmol·L^(-1)的二甲双胍处理成纤维细胞后,与空白对照组相比,实验组细胞数目较少,排列较稀疏,且呈剂量依赖性,细胞体积较小,呈长梭形,核小,轮廓较清楚。成纤维细胞的抑制率随二甲双胍剂量的增大而增加,呈剂量依赖性,均高于空白对照组(P均<0.05);经不同浓度二甲双胍处理的成纤维细胞中CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA mRNA和蛋白相对表达水平及TGFβ1、Smad3磷酸化水平随二甲双胍剂量的增加而降低,且呈剂量依赖性,均低于空白对照组(P均<0.05)。结论二甲双胍可抑制增生性瘢痕成纤维细胞CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA的表达,可能与TGFβ1/Smad信号通路调控有关。