中国Btken-Agcry1Ac杀虫毒素基因核心片段的克隆及核苷酸序列测定

摘要

用ＰＣＲ方法，将苏芸金芽孢杆菌肯尼亚亚种Ａｇ菌株（ＢａｃｉｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓｋｅｎｙａｅＡｇ，简称Ｂｔｋｅｎ－Ａｇ）编码ｃｒｙ１Ａｃ杀虫毒素蛋白的Ｎ末端（１．８４ｋｂ）的基因片段扩增后，用ＥｃｏＲⅠ消化成三个不同大小的片段，将原扩增片段及酶切片段分别连接到ｐＣＲ－Ｓｃｒｉｐｔ克隆载体后转化进大肠杆菌，将每一克隆片段进行序列测定，在此基础上又设计出特异引物，再次以ｃｒｙ１Ａｃ的ＰＣＲ产物为模板分别对两条链进行精确测序．并与已发表的肯尼亚亚种ＨＤ５８８－２菌株、库斯塔克亚种的ＨＤ－１和ＨＤ－７３菌株的ｃｒｙ１Ａｃ基因序列进行了比较．