EDTA对氯己定去除粪肠球菌生物膜效果的影响

摘要

目的 在体外环境下建立粪肠球菌(E.faecalis)生物膜,观察乙二胺四乙酸二钠(EDTA)作为分散剂对氯己定(CHX)清除生物膜效果的影响。方法 通过96孔板建立体外24h粪肠球菌生物膜模型,将生物膜随机分为A、B、C、D、E、F、G7组,A—E组分别加入1、2、4、8、16 MIC(最低抑菌浓度)EDTA+0.002%CHX,F组为单独用药组,G组为阴性对照组,均作用24 h后,采用MTT法测量各组生物膜的OD 490 值。在无菌羟磷灰石陶瓷片建立粪肠球菌24 h成熟生物膜模型,随机分为EDTA组、CHX组、EDTA+CHX组、阴性对照组,每组分别由相应药物作用24 h,经荧光染色后置于激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)下观察粪肠球菌生物膜变化。结果 A—E组OD 490 值显著低于F、G组(P0.05)。CLSM图像显示:成熟生物膜细菌密集、层叠,镜下以绿色荧光染色菌体为主;EDTA组于CLSM下可见生物膜结构稀疏,其中细菌密度及细菌数量显著降低,但仍以绿色荧光为主;CHX组生物膜中细菌数量减少,呈现黄色或桔色,部分区域为深红色;EDTA联合CHX组,生物膜中生物膜结构破坏,细菌数量明显减少,以红色荧光染色菌体为主。结论 EDTA对粪肠球菌生物膜具有分散作用,可增强CHX抗生物膜效果,但其作用效果与浓度无关。