利用InSyTe FLECT/CT成像技术动态观察急性肺结核小鼠感染模型的构建

摘要

目的 构建可应用于活体成像的近红外荧光减毒牛型结核分枝杆菌,并利用三维荧光发射计算机断层扫描(In-SyTe FLECT/CT)成像技术动态观察不同感染途径下急性肺结核小鼠感染模型的建立.方法 通过基因重组的方式将近红外荧光蛋白(near-infrared fluorescent protein,iRFP)基因iRFP720插入到游离型载体pMV261质粒,将携带iRFP720基因的质粒转染至 Mycobacterium bovis BCG str.Pasteur 1173P2(简称 BCG)中,筛选出稳定表达 iRFP720荧光蛋白的单克隆菌株 Mycobacterium bovis BCG str.Pasteur 1173P2::pMV261-iRFP720(简称BCG-iRFP720).体外传代扩增后分别经腹腔和尾静脉接种途径感染C57BL/6N小鼠,建立可视化急性肺结核小鼠感染模型,通过InSyTe FLECT/CT成像技术动态观察荧光菌株在小鼠体内分布情况.结果 获得了高水平稳定表达近红外荧光蛋白的BCG-iRFP720荧光菌株.该荧光菌株体外多次传代后在细胞水平和动物体内水平均能被激发出明显红色荧光,将稳定表达荧光蛋白的单克隆菌株分别经腹腔和尾静脉接种途径感染小鼠,InSyTe FLECT/CT活体成像发现,腹腔注射感染后第5天可见小鼠肺部红色荧光出现,而尾静脉注射感染后第1天即可见小鼠肺部红色荧光出现.结论 成功建立了稳定表达近红外荧光蛋白的减毒牛型结核分枝杆菌菌株.采用InSyTe FLECT/CT成像技术构建的可视化急性肺结核小鼠感染模型是拓展分枝杆菌在体内生长、转移及治疗相关研究的理想模型.