参麦注射液通过下调miR-106a保护肾小管上皮细胞NRK-52 E缺氧-复氧损伤的分子机制

摘要

目的 参麦注射液已被证实对心肌细胞缺血再灌注(I/R)损伤具有保护作用,但其对肾I/R损伤的保护作用并不明确.文章旨在探讨参麦注射液对肾小管上皮细胞NRK-52E缺氧-复氧损伤的的影响和可能分子机制.方法 构建NRK-52E细胞缺氧复氧模型模拟肾I/R损伤过程.根据干预方法不同,将NRK-52E细胞分为正常对照组、I/R组(缺氧6 h-复氧24 h)、参麦+I/R组(参麦注射液处理30 min,缺氧6 h-复氧24 h)、miR-NC+I/R组(转染miR-NC,缺氧6 h-复氧24 h)、miR-106a+I/R组(转染miR-106a模拟物,缺氧6 h-复氧24 h)、anti-miR-NC+I/R组(转染anti-miR-NC,缺氧6 h-复氧24 h)、an-ti-miR-106a+I/R组(转染anti-miR-106a,缺氧6 h-复氧24 h)、参麦+miR-NC+I/R组(转染miR-NC,参麦注射液处理30 min,缺氧6 h-复氧24 h)、参麦+miR-106a+I/R组(转染miR-106a模拟物,参麦注射液处理30 min,缺氧6 h-复氧24 h).细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-106a的表达水平,Western blot法检测磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)蛋白表达.结果 与正常对照组Ki67蛋白(0.76±0.07)、细胞活性(0.83±0.05)比较,I/R组(0.33±0.02、0.35±0.02)显著降低(P<0.05),与正常对照组Cleaved-caspase-3蛋白表达(0.42±0.04)、凋亡率[(5.06±0.32)％]比较,I/R组[(0.86±0.07、(16.11±1.01)％]显著升高(P<0.05);与I/R组Ki67蛋白、细胞活性比较,参麦+I/R组(0.70±0.07、0.77±0.06)明显升高,与I/R组Cleaved-caspase-3蛋白表达、凋亡率比较,参麦+I/R组(0.54±0.04、7.24±0.53)明显降低(P<0.05).I/R组NRK-52E细胞miR-106a的表达水平(3.27±0.25)较正常对照组(1.00±0.08)和参麦+I/R组(1.53±0.08)显著升高(P<0.05).与miR-NC+I/R组比较,miR-106a+I/R组NRK-52E细胞miR-106a的表达水平显著升高,细胞活性、Ki67蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.05);与anti-miR-NC+I/R组比较,anti-miR-106a+I/R组NRK-52E细胞miR-106a的表达水平显著降低,细胞活性、Ki67蛋白表达显著升高,细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.05).与参麦+miR-NC+I/R组比较,参麦+miR-106a+I/R组NRK-52E细胞miR-106a表达显著升高,细胞活性、Ki67蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.05).与正常对照组比较,I/R组NRK-52E细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与I/R组比较,参麦+I/R组NRK-52E细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与参麦+miR-NC+I/R组比较,参麦+miR-106a+I/R组NRK-52E细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平显著降低(P<0.05).结论 参麦注射液可促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,保护肾小管上皮细胞NRK-52E缺氧-复氧损伤,其机制可能与抑制miR-106a表达进而激活PI3K/AKT信号通路有关.