人肽抗生素hPAB-β分子的同源模建及其突变体设计

摘要

目的:获得肽抗生素hPAB-β的分子结构,设计其突变体. 方法:在序列比较的基础上,利用同源分子对hPAB-β进行同源模建,并以此为基础设计其突变体,通过PCR引入突变法获得突变体基因序列,将其克隆到原核融合蛋白表达质粒pQE-CP4中,转化JM109大肠杆菌进行表达. 结果:模建结果表明,hPAB-β由一个α螺旋和3个β片层构成,二级结构保守,具有两亲性结构;其α螺旋推测与活性寡聚体形成有关;Asp4带负电,可能通过削弱寡聚体中央微孔口处阳电荷富集区而降低目的分子的生物学活性.利用PCR成功克隆了所设计的突变体基因,通过构建融合蛋白表达质粒,实现了突变体融合蛋白在大肠杆菌中的表达. 结论:基于分子同源模建的肽抗生素hPAB-β突变体的设计、克隆和成功表达,为筛选肽链更短、抗菌活性保持不变或更强的新分子创造了前提.