miRNA-129-5p靶向调控VCP基因在人骨肉瘤细胞中表达初步探讨

摘要

目的含缬酪肽蛋白(valosin-containing protein,VCP)基因高表达能通过AKT/PI3K/NF-KappaB/MMP-9等信号通路促进骨肉瘤转移,但VCP基因上游调控机制仍不清楚。文中初步探讨miRNA-129-5p是否调控人骨肉瘤细胞中VCP基因表达及调控靶点。方法运用生物信息学预测软件TargetScanhuman 6.2(http://www.targetscan.org/)预测miRNA-129-5p在VCP基因(NM_007126)可能的作用位点。构建野生型VCP 3'UTR报告基因载体(psi-VCP Vector)及预测位点突变型VCP3'UTR报告基因载体(psi-VCPmut Vector),测序鉴定。细胞转染分4组,psi-VCP Vector+miRNA-129-5p mimic共转染U2-OS细胞为VCP实验组,psi-VCP Vector+阴性miRNA mimic共转染U2-OS细胞为VCP对照组;psi-VCP突变Vector+miRNA-129-5p mimic共转染U2-OS细胞为VCP突变实验组,psi-VCP突变Vector+阴性miRNA mimic共转染U2-OS细胞为VCP突变对照组。分别检测荧光海肾素酶活性。结果 Targetscan软件预测结果显示miRNA-129-5p在VCP 3'UTR163-169bp有且仅有1个保守作用位点;VCP实验组荧光海肾素酶活性(15.529±1.902)低于VCP对照组(21.781±0.854)、VCP突变实验组(19.978±1.377)、VCP突变对照组(21.952±1.516),差异有统计学意义(P<0.05);VCP突变对照组(21.952±1.516)与VCP对照组(21.781±0.854),差异无统计学意义(P=0.276)。结论 miRNA-129-5p在骨肉瘤细胞U2-OS中可能靶向调控VCP基因的表达及调控位点。