磁珠捕获技术在定量液相杂交中的应用

摘要

目的 :在建立新的微生物DNA液相定量杂交法的基础上 ,检测了 10株临床分离菌间染色体DNA的杂交率并与固相板法进行比较 ,为该法的推广应用奠定了基础。方法 :根据SYBRGreen1能够特异性结合双股DNA的特性 ,借助链霉亲和素包被磁珠的分离技术和偏振荧光探测方法的敏感性 ,分别捕获和检测游离于杂交液中两种DNA形成的杂交体 ,计算两者间的同源性。结果 :本法测得的 5株肠杆菌科标准菌株和临床分离株种间或科 /属间的杂交率与发表值一致。提示该法可用于各种细菌间的同源性测定 ,且结果稳定、可靠。结论 :偏振荧光法定量测定细菌染色体的同源性 ,具有简便、快速、敏感、特异等优点 ,可以避免微孔板定量杂交法中因DNA脱板所造成的误差 ,便于临床推广应用。