幽门螺杆菌Cag致病岛hp0540基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备

摘要

目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)Cag致病岛(Cag-pathogenicity island,Cag-PAI)编码的hp0540基因的原核表达系统,并制备其多克隆抗体。方法:应用PCR技术从Hp11637基因组DNA中扩增hp0540基因片段,克隆至pMD18-2T载体后,进行序列测定,并对其序列进行生物信息学分析;构建pET-28a-hp0540原核表达载体,转化表达宿主菌BL21DE3;经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE法鉴定目的蛋白的表达,并以Ni2+-NTA柱分离纯化目的蛋白;将纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并测定抗体效价。结果:成功克隆了hp0540基因,全长1 086 bp,编码361个氨基酸,与基因库公布的其他Hp菌株基因序列的核苷酸同源性为98%。工程菌诱导后SDS-PAGE显示新生表达蛋白带,相对分子质量约为39 000,经Ni2+-NTA柱纯化后可获得重组蛋白,重组蛋白免疫新西兰大白兔后获得效价为1∶160 000的多克隆抗体。结论:成功构建了hp0540基因的原核表达系统并制备了其多克隆抗体,为研究该基因的功能奠定了基础。