幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagQ基因缺失株的构建与鉴定

摘要

目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)Ⅳ型分泌系统cag Q基因缺失株。方法:通过PCR扩增出cag Q基因编码区侧翼同源臂序列,经TA克隆后进行双酶切,并将纯化后上下游同源臂连接至两端含有卡那霉素抗生素基因的载体p Bluscript SK II(-),构建为cag Q基因自杀质粒。利用电穿孔法将自杀质粒导入H.pylori,进行同源重组。培养后通过卡那霉素抗生素筛选出基因缺失株,并经PCR及核酸序列分析进一步确定基因缺失株。结果:H.pylori的cag Q基因自杀质粒p Blue KM40-△cag Q经酶切验证无误,进行电转化后经PCR及核酸序列分析结果正确。结论:成功获得H.pylori cag Q基因缺失株,命名为Hp26695-△cag Q。