miR-182-5p靶向叉头蛋白O3a促进A549肺癌细胞增殖及抑制其凋亡

摘要

目的 探讨微小RNA-182-5p(miR-182-5p)靶向叉头蛋白O3a(FOXO3a)对非小细胞肺癌(NSCLC) A549细胞增殖及凋亡的影响.方法 比较人正常肺上皮细胞BEAS-2B、NSCLC细胞A549中miR-182-5p的表达差异.选取A549细胞进行转染,分为miR-182-5p mimic组(转染miR-182-5pmimic)、miR-182-5p inhibitor组(转染miR-182-5p inhibitor)、NC mimic组(转染negative control mimic)和NC inhibitor组(转染negative control inhibitor).采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-182-5p表达,Western blotting检测FOXO3a蛋白表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡.双荧光素酶实验验证miR-182-5p与FOXO3a的靶向关系.结果 A549细胞和BEAS-2B细胞中miR-182-5p相对表达量分别为3.21 ±0.24、1.01 ±0.11,差异具有统计学意义(t=14.209,P＜0.001).NC mimic组、miR-182-5p mimic组、NC inhibitor组和miR-182-5p inhibitor组中miR-182-5p相对表达量分别为1.09 ±0.20、12.80±1.10、1.03±0.11、0.47 ±0.08,组间差异具有统计学意义(F=87.872,P＜0.001);上述4组的FOXO3a相对表达量分别为118.34±16.71、50.89±11.58、125.33 ±20.87、289.26±34.51,组间差异具有统计学意义(F =62.125,P＜0.001);4组72 h细胞增殖活性分别为1.12 ±0.13、1.70 ±0.14、1.07 ±0.13、0.71±0.11,组间差异具有统计学意义(F =31.336,P＜0.001),miR-182-5p mimic组细胞增殖活性较NC mimic组显著升高(P＜0.05),miR-182-5p inhibitor组细胞增殖活性较NC inhibitor组显著降低(P＜0.05);4组细胞凋亡率分别为(5.51±1.80)％、(1.41±0.50)％、(6.24±1.71)％、(47.93±5.12)％,组间差异具有统计学意义(F =211.081,P＜0.001),miR-182-5p mimic组细胞凋亡率较NC mimic组显著降低(P＜0.05),miR-182-5p inhibitor组细胞凋亡率较NC inhibitor组显著升高(P ＜0.001).miRNA靶基因预测软件预测miR-182-5p能作用于FOXO3a 3'非翻译区.与转染NC mimic相比较,共转染miR-182-5p mimic与FOXO3a-Wt后A549荧光素酶活性显著降低(1.20±0.14∶0.62±0.10,t=5.839,P=0.004).结论 miR-182-5p可通过靶向FOXO3a促进A549细胞增殖,并抑制细胞凋亡.