二价金属离子在分离大豆种子尿囊素酶中的作用

摘要

大豆 (Glycine max L.cv.Keyu 10 )种子和叶片提取液中的尿囊素酶 (ALNase)是热稳定的 ,但在Ca2 +、Mg2 +或 Mn2 +存在的条件下对热有不同的反应。 75℃热处理 5 min,种子提取液中的酶除 Mg2 +尚存有 1/ 3酶活性外 ,其余全部丧失 ,56%以上的蛋白质变性 ;叶片提取液中的酶除 Mn2 +使活性下降 36%外其余仍然稳定 ,热变性蛋白也不因 Ca2 +、Mg2 +和 Mn2 +的存在有明显增加。在室温下二价金属离子可以清除大豆种子提取液中 50 %以上非酶蛋白 ,但不影响酶活性。二价金属离子这种作用和其浓度无关 ,增加浓度反而有减弱的趋势 ,也不受 Na Cl的影响。两种 ALNase提取液对不同的难溶性钙盐也有不同的反应 ,种子提取液经 5% Ca SO4 处理后非酶蛋白减少近 50 % ,酶活性受影响不大 ;叶片提取液对Ca3 (PO4 ) 2 敏感 ,经处理后酶活性损失 50 %左右 ,蛋白损失近 70 %。 Mn2 +对种子提取液中 ALNase有激活作用 ,但这种激活作用随着酶的纯化而消失。乙二胺四乙酸钠 (EDTA)对两种提取液中 ALNase活性没有影响 ,但外加二价金属离子浓度接近