直接PCR方法在捻转血矛线虫耐苯丙咪唑类药物检测中的应用

摘要

为临床上能快速准确的鉴定捻转血矛线虫对阿苯达唑的耐药性情况,本研究建立了一种快速、灵敏、特异性强、成本低的捻转血矛线虫Ⅰ型β微管蛋白Direct-PCR扩增方法,合成通用引物后,对PCR退火温度进行筛选、进行特异性、敏感性、重复性试验,建立了捻转血矛线虫Ⅰ型β微管蛋白Direct-PCR扩增方法。该方法能特异性的扩增出捻转血矛线虫Ⅰ型β微管蛋白基因中一段385 bp序列,最佳退火温度为60℃,最低检测限度为19 ng。本研究应用建立的Direct-PCR方法和常规PCR方法对32份样品进行Ⅰ型β微管蛋白的提取,结果表明,Direct-PCR扩增阳性率为97%,而常规PCR扩增总阳性率为83%,2种方法差异不显著(P>0.05),但扩增阳性率比常规PCR方法效率高,说明该方法更具有推广和应用价值。该试验成功建立了捻转血矛线虫Ⅰ型β微管蛋白Direct-PCR扩增方法,为捻转血矛线虫耐阿苯达唑的快速诊断提供了一种新的方法。