药根碱靶向凝血因子Ⅻ发挥抗凝血作用的体外研究

摘要

目的 以凝血因子Ⅻ(coagulation factor Ⅻ,FⅫ)为靶点探讨药根碱抗血栓作用的机制.方法 通过Ledock软件将药根碱分子与内源性凝血途径接触激活阶段关键靶蛋白FⅫ、活化凝血因子FⅫ(actived coagulation factor Ⅻ,FⅫa)、凝血因子Ⅺ(co-agulation factor Ⅺ,FⅪ)和活化凝血因子Ⅺ(actived coagulation factor Ⅺ,FⅪa)进行分子对接,以结合能低于-5 kcal/mol作为阈值判断药根碱与接触激活因子的结合活性;采用体外凝血实验法检测血浆活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)、血浆凝血酶原时间(plasma prothrombin time,PT)、凝血酶时间(plasma prothrombin time,TT);乏因子血浆纠正试验检测FⅫ、FⅪ、凝血因子Ⅸ(coagulation factor Ⅸ,FⅨ)、凝血因子Ⅷ(coagulation factor Ⅷ,FⅧ)、凝血因子X(coagulation factor X,FX)和凝血因子Ⅶ(coagulation factor Ⅶ,FⅦ)的活性的抑制作用;Western blot法检测药根碱对FⅫ蛋白激活的抑制作用.结果 (1)分子对接实验表明,药根碱与FⅫa、FⅪa结合能均低于-5 kcal/mol,结合活性良好.(2)体外实验中,0.2-0.8 mg/mL药根碱均可显著延长APTT(P＜0.01),但不延长PT和TT(P＞0.05).(3)药根碱各剂量均显著降低FⅫ活性(P＜0.01),药根碱高剂量(0.8 mg/mL)可降低FⅪ活性(P＜0.05),但对FⅨ、FⅧ、FX及FⅦ活性无显著影响(P＞005).(4)药根碱各剂量均显著抑制FⅫ蛋白的激活(P＜0.01).结论 药根碱与FⅫa对接较好,显著延长APTT,抑制FⅫ蛋白激活,降低血浆FⅫ活性,提示其抗栓作用可能通过抑制FⅫ的活性而发挥.