4×35s增强子的克隆及其功能验证

摘要

用PCR扩增法获得含4×35s增强子的DNA片段，酶切后克隆到质粒pREP—GFP中，得到4×35s增强子插入方向相反的两种表达质粒pREPenl和pREPen2。并进行了测序确认．这两种表达质粒和pREP—GFP同时转化亮氨酸缺陷型裂殖酵母．荧光显微镜观察表明，pREP—GFPen1和pREP—GFPen2转化的酵母细胞，比pREP—GFP转化的酵母细胞所发的绿色荧光强8～10倍，体积大2～5倍．使用流式细胞仪和Lowry方法分别测定三种细胞平均荧光强度和蛋白量。测量结果表明：2×10‘细胞的平均荧光强度分别为1800U，1800U和200U；2×10^4细胞的GFP含量分别为200μg，200μg和25μg．这一结果证明4×35s增强子增强了gfp gene的表达水平，所克隆的4×35s增强子具有正常的功能．