水果及蔬菜表面环孢子虫卵囊检测方法的建立

摘要

为了建立检测果蔬表面人源卡耶坦环孢子虫(Cyclospora cayetanensis)卵囊的方法,分别用50,500个环孢子虫卵囊对环孢子虫卵囊阴性的新鲜果蔬进行人工污染,并设置阴性对照;使用含有0.1％ Alconox@,0.1％雕牌,0.1％立白、0.1％白猫的4种洗涤液和去离子水,在摇床中洗脱样品;然后,反复离心3次收集卵囊并提取卵囊DNA;最后,基于环孢子虫18S rRNA基因住点对卵囊DNA样品进行巢式PCR扩增.结果表明,卵囊污染吸附最佳时间为24 h,样品洗脱最佳时间为30 min.其中,只用去离子水时,生菜、西葫芦、黄瓜、西瓜、甜瓜和草莓的检测敏感性可达到50个卵囊,而西红柿可达到500个卵囊;当用不同洗涤剂时,各样品的检测敏感性均可达到50个卵囊.不同洗涤剂之间检测敏感性无显著差异.该研究初步建立检测水果、蔬菜污染环孢子虫卵囊的技术,采用此方法可特异、敏感、快速的检测果蔬表面环孢子虫卵囊,为食源性环孢子虫病暴发溯源提供技术支持.