三叶因子3对非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响

摘要

目的 探讨TFF3基因在非小细胞肺癌中的作用及其对凋亡的影响.方法 免疫组织化学法检测组织芯片31例肺腺癌、21例肺鳞癌、10例正常肺组织TFF3表达阳性率;慢病毒包装TFF3基因ORF序列及TFF3-shRNA基因质粒、转染、嘌呤霉素筛选获得稳定过表达及沉默TFF3基因的A549细胞株;实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)和蛋白质印迹(Western blot)法验证TFF3基因和蛋白表达水平,West-ern blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和信号通路分子Akt表达水平.流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 肺腺癌和鳞癌组织TFF3蛋白阳性表达率显著高于正常肺组织(P<0.05),Ⅲ级肺癌组织中TFF3阳性表达率高于Ⅰ～Ⅱ级(P<0.05),有淋巴结转移的肺腺癌和鳞癌组织中TFF3阳性表达率高于无淋巴结转移组织(P<0.01).过表达TFF3的A549细胞(A549-TFF3)中TFF3基因及蛋白水平显著高于对照组,沉默TFF3基因的A549细胞(A549-shTFF3)中TFF3 mRNA及蛋白水平较对照组明显降低(P值均<0.01).Western blot检测Bcl-2/Bax、p-Akt、p-Akt/Akt在A549-TFF3组显著高于对照组(P<0.01);在A549-shTFF3组Bcl-2/Bax、p-Akt表达水平显著低于对照组(P<0.01),p-Akt/Akt表达水平低于对照组(P<0.05),Akt表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05).流式细胞结果显示A549-TFF3细胞凋亡率较低(P<0.01),A549-shTFF3细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.01).结论 非小细胞肺癌组织TFF3高表达,与病理分级及淋巴结转移有相关性.过表达TFF3在非小细胞肺癌细胞中可能通过激活Akt信号通路抑制肺癌细胞凋亡,促进肿瘤细胞恶性增生.