葡激酶突变体Y_1-Sak的体外变复性研究

摘要

具有低免疫原性的双功能葡激酶突变体Y1Sak(△15,S16K,K74A,E75A,R77A,K109R,F111D)在大肠杆菌中的表达产物为包涵体,必须进行体外变复性才能得到活性.详细研究了复性方式、pH、温度、复性的初始蛋白浓度和添加L精氨酸对Y1Sak的体外变复性的影响,发现复性温度和添加的L精氨酸对Y1Sak的复性有重要的影响.经过工艺优化后,Y1Sak的纯化活性回收率达到40%左右,蛋白比活性由20 kU/mg提高到53 kU/mg.用动态光散射分析发现,工艺优化后复性的高比活性Y1Sak的水合动力学半径与野生型葡激酶相近,分子基本处于单体状态.