丹参酮ⅡA减轻棕榈酸诱导的心肌细胞凋亡及内质网应激

摘要

[目的]探讨丹参酮ⅡA对棕榈酸诱导心肌细胞脂毒性损伤模型内质网应激凋亡的影响.[方法]将对数期H9c2细胞分6组,即对照组,棕榈酸(400μmol/L)组,丹参酮ⅡA 20μmol/L组和棕榈酸+丹参酮ⅡA(5、10、20μmol/L)组,另外引入棕榈酸+CCT020312组与棕榈酸+CCT020312+丹参酮ⅡA 20μmol/L组考察通路激活状态.细胞计数试剂盒8(CCK-8)法测定H9c2细胞活力;流式细胞术测定细胞凋亡情况;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测细胞内质网应激相关分子葡萄糖调控蛋白78(GRP78)、转录激活因子4(ATF4)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞GRP78、ATF4、CHOP、Caspase-3、Caspase-9、Caspase-12、蛋白激酶RNA样内质网激酶(PERK)、磷酸化PERK(p-PERK)、真核生物翻译起始因子2α(eIF2α)、磷酸化eIF2α(p-eIF2α)的蛋白表达水平.[结果]与对照组比较,棕榈酸组细胞存活率显著降低(P<0.01),GRP78、ATF4、CHOP mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.01),H9c2细胞的凋亡率升高,p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例也显著增大(P<0.01),凋亡相关分子Caspase-3、Caspase-9和Caspase-12蛋白表达水平均显著升高(P<0.01).不同浓度丹参酮ⅡA作用后,与棕榈酸组比较,棕榈酸+丹参酮ⅡA(5、10、20μmol/L)组细胞存活率显著升高(P<0.01),GRP78、ATF4、CHOP mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),H9c2细胞的凋亡率降低,p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例也显著减小(P<0.01),Caspase-3、Caspase-9和Caspase-12蛋白表达水平显著降低(P<0.01),均具有剂量依赖性,且棕榈酸+丹参酮ⅡA 10μmol/L组(P<0.05)和棕榈酸+丹参酮ⅡA 20μmol/L组(P<0.05)变化显著.加入PERK通路激活剂CCT020312作用后,与棕榈酸组比较,棕榈酸+CCT020312组的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例,细胞凋亡率,GRP78、ATF4、CHOP的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);再经过丹参酮ⅡA处理,与棕榈酸+CCT020312组比较,棕榈酸+CCT020312+丹参酮ⅡA组的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例,细胞凋亡率,GRP78、ATF4、CHOP的mRNA和蛋白表达水平均显著回降(P<0.05).[结论]丹参酮ⅡA可减轻心肌细胞脂毒性损伤,其机制与其通过抑制PERK信号通路活化来减轻棕榈酸诱导的心肌H9c2细胞凋亡,并且控制内质网应激反应有关.