七叶亭对高糖诱导的视网膜色素上皮细胞HIF-1α/BNIP3通路介导自噬的影响

摘要

目的:探讨七叶亭对高糖诱导的视网膜色素上皮(RPE)细胞损伤的影响及其与缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/E1B-19kDa相互作用蛋白3(BNIP3)通路介导的自噬的作用关系。方法:体外培养人RPE细胞系ARPE-19,高糖进行诱导,并对其用不同浓度(1.0μmol/L、2.5μmol/L、5.0μmol/L)七叶亭处理,将细胞分为对照组、高糖组、七叶亭(1μmol/L、2.5μmol/L、5.0μmol/L)组,七叶亭+2ME2(5.0μmol/L七叶亭+1.0μmol/L的HIF-1α/BNIP3通路抑制剂2ME2)组。细胞计数盒8(CCK-8)法检测细胞活力;2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法检测ROS含量;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)的水平;透射电子显微镜检测细胞自噬;蛋白免疫印迹(WB)法检测HIF-1α/BNIP3通路蛋白、增殖蛋白β-catenin及自噬蛋白Beclin1、LC3的表达。结果:与对照组比较,高糖组ROS含量、TNF-α、IL-6水平、蛋白Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及蛋白HIF-1α、BNIP3表达升高,细胞活性、蛋白β-catenin表达降低(P<0.05);与高糖组比较,七叶亭处理组细胞活性、蛋白β-catenin、Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及蛋白HIF-1α、BNIP3表达升高,细胞ROS含量、TNF-α、IL-6水平降低(P<0.05),且呈剂量依赖;与5μmol/L七叶亭组比较,七叶亭+2ME2组上述指标水平均得到逆转。结论:七叶亭可能通过激活HIF-1α/BNIP3介导的自噬降低高糖诱导的氧化应激造成的ARPE-19细胞损伤。