一种新型抗体导向核酸转移系统关键组分的制备及鉴定

摘要

目的制备并鉴定葡萄球菌A蛋白-多聚赖氨酸交联物(SPA-PLL交联物),以此交联物为"接头",构建一种新型的抗体导向核酸转移系统。方法采用SPDP化学偶联法制备SPA-PLL交联物;采用SDSPAGE电泳法测定SPA-PLL交联物的纯度;采用酶联法或DNA凝胶阻滞实验分别测定SPA-PLL交联物与IgG或DNA片段的结合;将SPA-PLL交联物与Tfr抗体和p EGFP-C1质粒以适宜的质量比混合即可组装成Tfr抗体导向pEGFP-C1质粒转移系统;将该抗体导向的pEGFP-C1质粒转染人肝癌HepG2细胞,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达。结果 SPA-PLL交联物纯度较高,能良好地结合多种Ig G抗体,同时也能较好地结合pEGFP-C1质粒、中和其负电荷;Tfr抗体导向pEGFP-C1质粒转移系统能特异性地转染Hep G2细胞,并使pEGFP-C1质粒在细胞中有效表达。结论 SPA-PLL交联物能与核酸片段和IgG抗体非共价结合,并具有良好通用性;以此制备抗体导向核酸转移系统的过程简单方便。