利用酵母双杂交技术筛选与新孢子虫NcSRS2蛋白相互作用的宿主蛋白

摘要

【目的】筛选与鉴定与新孢子虫NcSRS2蛋白相互作用的Vero细胞蛋白。【方法】从Nc1株犬新孢子虫速殖子中提取DNA作为模板,PCR扩增NcSRS2基因,克隆于pGBKT7表达载体,构建诱饵载体pGBKT7-NcSRS2,转化入Y2H酵母感受态细胞,进行自激活活性验证和细胞毒性检测。利用酵母双杂交技术,以转化诱饵载体pGBKT7-NcSRS2的Y2H酵母菌株与Vero细胞cDNA文库进行酵母双杂交,筛选与NcSRS2蛋白相互作用的宿主蛋白,对阳性克隆进行测序,并用BLAST分析,筛选出与NcSRS2存在相互作用的Vero细胞蛋白质。【结果】诱饵载体pGBKT7-NcSRS2无自激活活性和细胞毒性,可用于文库筛选。运用酵母双杂交系统,筛选出2个与NcSRS2相互作用的Vero细胞成分,分别是NADH dehydrogenase subunit 1和STMN2。【结论】本研究首次运用酵母双杂交技术筛选出与新孢子虫NcSRS2相互作用的Vero细胞蛋白质,为进一步研究犬新孢子虫NcSRS2参与黏附及入侵宿主细胞的机制奠定基础。