蝙蝠蛾幼虫肠道真菌复合体中的多菌种与中国被毛孢分生孢子联合侵染蝙蝠蛾幼虫提高侵染效能

摘要

应用真菌特异性引物PCR测序、克隆测序和SNP质谱基因分型法,鉴定2株蝙蝠蛾幼虫活体肠道的真菌分离株(CH1和CH2)中的多种菌物.应用这2株分离株与中国被毛孢分生孢子联合侵染蝙蝠蛾幼虫,观察其协同侵染活性.结果表明这2株分离株呈现中国被毛孢的体外培养生长和显微形态特征.通用引物ITS4/5和蝙蝠蛾拟青霉特异性引物Pp4/5扩增子测序检出蝙蝠蛾拟青霉和中国被毛孢ITS序列.扩增子克隆-测序和SNP基因分型法证实多种转换和颠换点突变基因型在2株分离株中共存.反复固体、液体培养证实蝙蝠蛾拟青霉和中国被毛孢ITS序列共存,并非真菌间DNA片段漂移.应用子囊孢子或中国被毛孢侵染4～5龄蝙蝠蛾幼虫,幼虫染菌率为1.37％～ 3.52％,幼虫变僵时间为35～50 d.应用2株分离株与中国被毛孢分生孢子联合侵染,幼虫变僵时间为5～8d,染菌率达55.2％(P＜0.001),侵染效能提高15～ 39倍.蝙蝠蛾拟青霉和多种点突变基因型冬虫夏草菌(包括中国被毛孢)在蝙蝠蛾幼虫肠道以天然真菌复合体形式共存;多种菌物组成的侵染源联合侵染蝙蝠蛾幼虫大幅度提高侵染效能,呈现多菌协同侵染的共生关系.