反义硫代寡聚核苷酸对抗日本脑炎病毒的活性

摘要

目的：针对日本脑炎病毒ＳＡ－１４株病毒基因组５＇端第一个ＡＵＧ起始码前后和非结构蛋白ＮＳ５的５＇端基因区设计并合成了两个硫代的反义寡聚核苷酸（二十聚），观察了它们对病毒在ＢＨＫ－２１细胞中复制的影响．方法：以定量病毒攻击ＢＨＫ－２１细胞，分别测定ＣＰＥ，病毒蛋白质表达及病毒空斑形成抑制率，观察不同浓度的反义核酸在不同时间对病毒复制的作用．结果：细胞培养液中含有１．０μｍｏｌ／Ｌ即可明显推迟ＣＰＥ的出现，时间可达４８ｈ，浓度提高４倍仍未能完全抑制ＣＰＥ的发生．２．５μｍｏｌ／Ｌ反义核酸对病毒蛋白抗原表达无抑制作用，而较高浓度（５．０，１０．０和２０．０μｍｏｌ／Ｌ）则可抑制抗原表达，并可维持９６ｈ左右．病毒空斑试验结果却显示反义核酸的抑制作用在１８ｈ时最强（其中片段一５．０μｍｏｌ／Ｌ时的空斑形成抑制率超过９０％），２４ｈ后上述作用很快消失．此外，高浓度（８０．０μｍｏｌ／Ｌ）反义核酸对ＢＨＫ－２１细胞无明显毒性．结论：人工合成的反义核酸能明显抑制日本脑炎病毒的致细胞病变作用、抗原表达及复制．此作用呈现出暂时性、特异性及反义核酸剂量依赖性．