天门冬酰胺酶基因在黑曲霉中的同源表达

摘要

根据NCBI中的黑曲霉天门冬酰胺酶基因asp序列(GI∶ 145231287)设计特异性引物,从黑曲霉CICC2462基因组中扩增asp基因编码区,构建其黑曲霉表达载体pSZHG-Asp.通过农杆菌介导法转化黑曲霉,筛选以asp基因置换糖化酶基因glaA的同源重组转化子.对转化子的表达产物进行SDS-PAGE分析和酶活检测.获得8株在glaA位点发生基因置换的同源重组转化子,并对其中4株的上清液进行检测.SDS-PAGE结果显示,在42 000处有目的蛋白质条带,重组菌株的目的蛋白质表达量为185～417 μg/mL,发酵液最高酶活为21 111 U/mL.